作者: MAGI (我怎麼可以這麼G8) 看板: Fuck
標題: 幹您老師咧，終於弄出來了
時間: 東吳機研站 Wed Sep 10 21:42:04 2003
哈哈哈，搞了3個禮拜，終於讓我搞出來了
第一個禮拜，搞insert出來，PCR怎麼跑都有一條雜band
試了一個禮拜最後只好用跑膠回收的方式取得major band
你能想像1.5ml的PCR產物在你眼前晃嘛？ 還得把他全部跑膠回收！
再來，把跟vector insert 切BamHI EcoRI 5.5hrs，這也是試了一個禮拜
最後才想到延長反應時間.....
跑膠回收片段，進行ligation，5度c，16度c o/n 都試過就是沒有該死的colony
他媽的卯起來，37度c 25小時，因為溫度高一點，反應速率加快，產物多
終於，總共24顆colony，全抽了，幹，一整個早上下午就在那抽質體
手指頭都起水泡了，晚上用EcoRI切，只有3顆分子量對
今天，切兩刀，另外切一個只有insert才具備的酵素切點
只有一個有被切，而且分子量對，幹尼娘，就別給我定序出來frame是錯的
接下來就是搞重組蛋白出來，還得試試其活性，試出來還要幹嘛？
希望不要抽不到蛋白，之前也抽過半年弄不到蛋白的，還是別人做過的
希望能抽到....希望有活性.....
--
※From: 東吳機研 scumotor.com.tw MAGI From 140.128.143.33 ...
一個玩車人的天地/各車系專屬區/GP SBK TIS賽事討論區/進口車討論區/